十五项耳聋基因芯片联合一代测序检测聋儿家

中华耳科学杂志,年17卷5期

十五项耳聋基因芯片联合一代测序检测聋儿家庭的致聋变异分析

林颖周枫黄利芬张群慧

王兴君王淑杰于锋

近10年来，随着遗传性耳聋基因诊断技术的快速发展及广泛推广，遗传性耳聋已被大量研究，其中非综合征型耳聋（nonsyndromichearingimpairment，NSHI）仍占绝大多数，虽然不同国家、地区、民族、年龄的致聋基因变异有差异性，但流行病学大数据显示我国非综合征型耳聋的最常见致聋基因为GJB2、SLC26A4、线粒体基因。因此致聋热点变异筛查对了解人群中携带率、指导高危人群优生优育、新生儿听力、用药规范等极为重要；而通量高、花费少、接受度广的技术则是快速精准诊断的关键所在。本研究旨在通过十五项耳聋基因芯片[1]联合Sanger测序技术对广州市两个特殊听障机构的非综合征型耳聋家庭易感基因进行检测，了解此机构致聋变异的携带率，提高诊断率，并对高危家庭进行遗传咨询及再生育指导[2]，以期降低聋儿的出生率。

1资料与方法

遵循自愿原则，收取来自广州市某两个特殊听障机构的先证聋儿及其父母、直系兄弟姐妹的静脉血2-3ml血样，80组家庭，共人，排除严重的全身各系统器质性病变，详细病史采集，填写受检者基本信息、耳聋家族史、噪音接触史及以往用药史。并按照我院伦理委员会规定签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1提取DNA

采用天根生化科技有限公司生产的《血液基因组DNA提取系统（非离心柱型）》（货号：DT-02），从耳聋患者外周血中提取基因组DNA，用德国Thermo公司紫外分光光度计检测DNA浓度（-ng/μl）和纯度（OD/=1.7-2.0），其余保存于-70℃冰箱备用。

1.2.2耳聋基因芯片筛查

采用十五项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）（北京博奥生物有限公司，货号）对DNA进行GJB2(c.35delG，c.del16bp，c.delC及c._delAT)，GJB3(c.CT)，SLC26A4(c.-2AG，c.AGc.CT，c.GC，c.AT，c.GA，c.TA和c.IVS15+5GA)和MT-RNR1(m.AG，m.CT)15个热点变异检测。通过PCR、磁珠、杂交、芯片洗涤、芯片扫描等步骤，最后分析系统自动判读结果。

1.2.3Sanger测序

对基因芯片检测出纯合变异、复合杂合变异和单杂合变异的家庭进行编码序列分析验证。此步骤由北京博奥晶典生物技术有限公司完成。

1.2.4序列对比

DNA测序结果与NCBI网站（

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